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Oct 28, 2023

Scientific Reports volumen 13, Número de artículo: 8940 (2023) Citar este artículo

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Con el aumento de las β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) y las enzimas CTX-M, el tratamiento antimicrobiano de las infecciones por enterobacterias se está volviendo cada vez más desafiante. Nuestro estudio tuvo como objetivo una caracterización molecular de cepas de E. coli fenotípicamente ESBL-positivas obtenidas de hemocultivos de pacientes del Hospital Universitario de Leipzig (UKL), Alemania. La presencia de CMY-2, CTX-M-14 y CTX-M-15 se investigó con el kit Streck ARM-D (Streck, EE. UU.). Las amplificaciones en tiempo real se realizaron con el termociclador QIAGEN Rotor-Gene Q MDx (QIAGEN, Thermo Fisher Scientific, EE. UU.). Se evaluaron antibiogramas y datos epidemiológicos. Entre 117 casos, el 74,4 % de los aislados mostró resistencia a ciprofloxacino, piperacilina y ceftazidima o cefotaxima mientras que era sensible a imipenem/meropenem. La proporción de resistencia a la ciprofloxacina fue significativamente mayor que la proporción de susceptibilidad a la ciprofloxacina. Al menos uno de los genes investigados se detectó en el 93,1 % de los aislados de E. coli en hemocultivos: CTX-M-15 (66,7 %), CTX-M-14 (25,6 %) o el gen ampC mediado por plásmido CMY-2 (3,4%). El 2,6 % dio positivo en dos genes de resistencia. 94 de las muestras de heces correspondientes dieron positivo para E. coli productora de ESBL (94/112, 83,9 %). 79 (79/94, 84 %) cepas de E. coli encontradas en las muestras de heces coincidieron fenotípicamente con el aislado de cultivo de sangre del paciente respectivo (MALDI-TOF, antibiograma). La distribución de genes de resistencia estuvo de acuerdo con estudios recientes en Alemania y en todo el mundo. Este estudio proporciona indicaciones de un foco endógeno de infección y enfatiza la importancia de los programas de detección para pacientes de alto riesgo.

Se sabe que Escherichia coli forma parte de la flora intestinal humana natural, pero también puede causar infecciones intestinales o extraintestinales1. En particular, E. coli es un aislado frecuente en pacientes adultos con bacteriemia2. Las fuentes más comunes de infecciones del torrente sanguíneo por E. coli son las infecciones del tracto urinario, la sepsis abdominal y la neumonía3,4.

El tratamiento antimicrobiano de tales infecciones se complica hoy en día por el hecho de que la prevalencia de enterobacterias productoras de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) que llamaron la atención por primera vez en la década de 1980 está en aumento desde entonces5. Las primeras β-lactamasas de espectro extendido descritas fueron del tipo TEM y SHV y se aislaron principalmente de E. coli y K. pneumoniae6. Las ESBL del grupo CTX-M se aislaron por primera vez de E. coli y se informaron en Alemania en 19897. Actualmente, se han convertido en las ESBL más comunes en todo el mundo y las enzimas CTX-M-15 y CTX-M-14 se encuentran con mayor frecuencia en humanos. especímenes a nivel mundial8,9.

En este contexto y considerando el aumento de la resistencia antimicrobiana de E. coli debido a las β-lactamasas de espectro extendido, este estudio tuvo como objetivo la caracterización molecular de las BLEE detectadas en cepas de E. coli obtenidas de hemocultivos de pacientes del Hospital Universitario de Leipzig ( UKL), Alemania. Además, nuestro estudio aporta datos epidemiológicos y patrones de resistencia de las cepas aisladas. Para encontrar indicaciones de un foco de infección endógeno para la bacteriemia por E. coli, se buscó en la base de datos del laboratorio las muestras de heces correspondientes con evidencia de E. coli productora de BLEE para cada paciente. Siempre que estuvo disponible, se compararon los patrones de resistencia de ambas cepas (cultivo de sangre y muestra de heces) de los pacientes individuales.

Todas las cepas de E. coli investigadas con este estudio se recolectaron entre 2015 y 2018 de pacientes de la UKL. Eran aislados de hemocultivos o cepas que se recuperaron durante un cribado continuo adaptado al riesgo de muestras de heces para detectar cepas resistentes a múltiples fármacos.

Como parte de este cribado, se examinan muestras de heces y exudados rectales para detectar la presencia de bacterias productoras de carbapenemasas y β-lactamasas empleando los medios cromogénicos CHROMagar ESBL y CHROMagarTM ESBL (Mast Diagnostica, Alemania) como procedimiento de prueba inicial. Las muestras de heces y rectales se recolectaron como parte de este programa de detección de UKL y no fueron recolectadas por ninguno de los autores ni para los propósitos de este estudio en primer lugar. Por lo tanto, no hubo participantes humanos involucrados en este estudio. Todas las cepas recuperadas se identificaron con MALDI-TOF (BioMerieux, Francia). En total, 117 cepas de hemocultivos (ECB) con evidencia fenotípica de producción de BLEE y 112 cepas recuperadas del cribado (ECS) se consideraron para análisis adicionales. Para 94 de los pacientes con bacteriemia, se dispuso de cultivos de detección de heces positivos para ESBL. Esos, así como todos los aislados de hemocultivos, se analizaron más a fondo con este estudio.

Todos los aislados de E. coli se sometieron a microdilución en caldo realizada de acuerdo con el Comité Europeo de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana (EUCAST). Se determinaron las concentraciones inhibitorias mínimas (MIC) para los siguientes antibióticos: ampicilina, ampicilina/sulbactam, piperacilina, piperacilina/tazobactam, ceftazidima, cefotaxima, cefuroxima, aztreonam, imipenem, meropenem, amikacina, gentamicina, tobramicina, ciprofloxacina, levofloxacina, moxifloxacina, colistina , fosfomicina, trimetoprima/sulfametoxazol y tigeciclina. Se usó E. coli ATCC 25922 como cepa de control de calidad.

Se realizaron pruebas fenotípicas para la producción de ESBL para todos los aislamientos con una CIM de ≥ 1 mg/l para cefotaxima, ceftazidima o aztreonam. Para este propósito, se empleó un sistema de prueba de gradiente usando tiras reactivas de cefotaxima/ácido clavulánico y ceftazidima/ácido clavulánico (Etest®, bioMérieux, Francia). De acuerdo con las recomendaciones del fabricante, las colonias bacterianas individuales se transfirieron a una solución de NaCl al 0,5 % hasta que se obtuvo un estándar de MC Farland de 0,5. Luego, la suspensión se sembró en agar Müller-Hinton, se aplicaron las tiras y las pruebas se incubaron durante 18 a 24 horas a 37 °C. A todos los aislamientos positivos en la prueba de gradiente se les analizó la presencia de los genes de betalactamasa de espectro extendido CTX-M-14 y CTX-M-15 y el gen ampC mediado por plásmido CMY-2.

Se suspendieron colonias individuales de aislados individuales de E. coli en agua estéril libre de proteasa, RNasa y DNasa y luego se sometieron a extracción automatizada de ADN mediante el sistema MagNa Pure 96 (Roche Diagnostics, Francia). Con el fin de identificar los genes diana (CMY-2, CTX-M-14 y CTX-M-15), se utilizó el PCR Mix 1 comercial de Streck ARM-D® Kit (Streck, EE. UU.), β-Lactamasa + MasterMix con Se utilizaron sondas de ADN marcadas con fluorescencia. Las amplificaciones en tiempo real de los genes diana se realizaron con el termociclador QIAGEN Rotor-Gene Q MDx (QIAGEN, Thermo Fisher Scientific, EE. UU.) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Los antibiogramas y los datos epidemiológicos fueron recopilados por el laboratorio IT Hybase (epiNET AG, Alemania) y LabCenter (i-solutions health GmbH, Alemania). HyBase® y Microsoft Excel se utilizaron para las siguientes evaluaciones.

En total, se conservaron 130 aislamientos de E. coli productores de ESBL y se incluyeron en la investigación adicional. Dado que 13 aislamientos resultaron ser duplicados del mismo paciente, no se incluyeron en ninguna evaluación estadística, lo que dejó 117 aislamientos para análisis posteriores.

Durante el período de 2015 a 2018, se enviaron 159 074 hemocultivos para evaluación microbiológica de pacientes de UKL. De estos, 26.427 produjeron crecimientos bacterianos (tasa de positividad: 16,6%). Dado que se enviaron cultivos múltiples para pacientes individuales con cultivo positivo (n = 9910), se realizó un diagnóstico correspondiente de bacteriemia en el 6,2% de todos los casos. En total, en 1020 casos se documentó bacteriemia por E. coli (10,3 %), de los cuales 153 casos en los que se detectaron cepas productoras de BLEE (15 %). Así, de 9.910 pacientes que padecían bacteriemia, se documentaron cepas de E. coli productoras de BLEE en el 1,5% de los casos. En total, se recolectaron e incluyeron en las investigaciones 130 cepas de E. coli productoras de ESBL. Entre estos, 13 aislamientos eran duplicados de pacientes individuales, por lo que se eliminaron de cualquier evaluación estadística dejando 117 aislamientos para una interpretación posterior.

Los datos de susceptibilidad para los 117 ECB se proporcionan en la Tabla 1 y las distribuciones de MIC se muestran en la Fig. 1. Los resultados muestran que además de la resistencia a los ß-lactámicos, el 74,4 % (87/117) también eran resistentes a la ciprofloxacina.

Distribuciones MIC del BCE.

En 109 de los 117 aislamientos (93,1 %), se detectó al menos uno de los genes investigados, siendo el genotipo CTX-M-15 el más prevalente (78/117, 66,7 %), seguido del genotipo CTX-M-14 (30/117, 25,6%) y CMY-2 (4/117, 3,4%). Tres aislamientos (2,6%) resultaron positivos para la posesión de dos genes de resistencia simultáneamente (uno para CMY-2 y CTX-M-15, uno para CTX-M-14 y CMY-2, uno para CTX-M-15 y CTX-M-14). Finalmente, 8 aislamientos (8/117, 6,8%) fueron negativos para los genes probados. La distribución de los genes examinados se muestra en la Fig. 2.

Distribución de los genes de resistencia a los antimicrobianos detectados (genes ampC productores de ESBL y mediados por plásmidos).

Las pruebas de susceptibilidad para los aislados positivos para CTX-M-15 mostraron que > 97 % de las muestras (76/78) eran resistentes a la cefotaxima, mientras que solo dos de los aislados analizados eran sensibles a la cefotaxima (2/78, 2,6 %). Hubo una resistencia a la ceftazidima en > 61 % de los aislamientos positivos para CTX-M-15 (48/78).

Todos los aislados CTX-M-14 positivos (30/30) fueron resistentes a cefotaxima con una CIM > 4 mg/l, mientras que el 60% tampoco fue sensible a ceftazidima (18/30). Además de una resistencia a los antibióticos ß-lactámicos, se detectó una alta proporción de cepas con un nivel de MIC de ciprofloxacino aumentado (≥ 0,5 mg/l) (89/117, 76,1%), incluso un 74,4% (87/117) con un nivel de MIC ≥ 1 mg/l.

De los 117 pacientes bacteriémicos incluidos en este estudio, 112 habían enviado muestras de heces antes del momento de la bacteriemia. 94 de estas muestras dieron positivo para E. coli productora de ESBL (94/112, 83,9 %). Retrospectivamente, un total de 79 (79/94, 84 %) cepas de E. coli encontradas en las muestras de heces coincidieron fenotípicamente con el aislado de cultivo de sangre del paciente respectivo (MALDI-TOF, antibiograma). La comparación entre las muestras de heces y los hemocultivos que dieron positivo para BLEE se muestra en la Tabla 2. Considerando la resistencia a ciprofloxacino, el 55,4% (62/112) de los pacientes estaban colonizados con una cepa BLEE positiva y resistente a ciprofloxacino. 15 (15/94, 16%) de los aislamientos no mostraron coincidencia fenotípica entre el aislamiento de hemocultivo y la muestra de heces respectiva.

La Tabla 3 muestra la epidemiología de E. coli multirresistente durante el período de investigación. Entre 2015 y 2018 hubo 12.346 casos de infección por E. coli invasiva, es decir aislamientos de E. coli excluyendo hisopos rectales y muestras de heces. En general, el 13,1 % (1614/12 346) fueron causados ​​por aislamientos productores de BLEE, mientras que el 8,0 % (988/12 346) de estos fueron causados ​​por cepas productoras de BLEE con resistencia adicional a la ciprofloxacina; dentro de los aislamientos ESBL positivos, la proporción de resistencia a la ciprofloxacina (61,2%, 988/1614) fue significativamente mayor que la proporción de susceptibilidad a la ciprofloxacina. Además, se detectaron 1020 casos de infecciones del torrente sanguíneo por E. coli durante el período de investigación. Entre los 117 casos incluidos en este estudio, el 74,4% de los aislados mostraban resistencia a ciprofloxacino, piperacilina, así como a ceftazidima o cefotaxima, mientras que eran sensibles a imipenem/meropenem.

Nuestro estudio se centró en pacientes con bacteriemia causada por cepas de E. coli productoras de BLEE. El genotipo de BLEE dominante en nuestros aislados fue CTX-M-15 (78/117, 66,7 %), seguido del genotipo CTX-M-14 (30/117, 25,6 %) y AmpC CMY-2 (4/117, 3,4 %). ). Estos resultados subrayan informes anteriores de que la CTX-M-15 en todo el mundo es la BLEE más prevalente encontrada en Enterobacteriaceae10. También están en línea con un estudio anterior en Alemania que aborda la epidemiología molecular de las Enterobacteriaceae productoras de ESBL entre 156 residentes de hogares de ancianos en Bavaria11. HaYE et al. analizaron infecciones del torrente sanguíneo debidas a E. coli en pacientes con cáncer del Centro Médico Samsung en Seúl; encontraron CTX-M-14 (37,7 %), CTX-M-15 (26,1 %) o tanto CTX-M-15 como CTX- M-14 (10,1%) en sus aislados12. Sin embargo, investigadores de la Universidad Médica de Nara, un hospital de atención terciaria en Japón, que informaron casos de bacteriemia con E. coli productora de BLEE, encontraron que BLEE-EC CTX-M-27 (33,3 %) y CTX-M-14 (30 % ) fueron los genes más prevalentes13.

Varios estudios evaluaron la tasa de transporte fecal de E. coli productora de BLEE, es decir, se informó que la tasa era del 14,7 % en los residentes de hogares de ancianos bávaros y del 6,3 % en la población sana11. La prevalencia de E. coli productora de BLEE en muestras fecales de 650 pacientes hospitalizados informada en un estudio en China, Beijing, fue del 25,7 %14, mientras que un estudio de Ankara, Turquía, informó que la tasa de portadores de BLEE fue del 34,3 % para 1402 pacientes ambulatorios con E. siendo las cepas coli las más frecuentes15.

Dado que nuestro hospital cuenta con un extenso programa de detección de microorganismos resistentes a múltiples fármacos, también pudimos abordar el transporte fecal de cepas de E. coli productoras de ESBL de los pacientes con infecciones del torrente sanguíneo de nuestro estudio. Curiosamente, de los 117 pacientes bacteriémicos incluidos en este estudio, 112 habían enviado muestras de heces antes del momento de la bacteriemia y 94 de estas muestras produjeron E. coli productora de BLEE (94/112, 83,9 %). 79 de las cepas de E. coli encontradas en las muestras de heces coincidían fenotípicamente con el cultivo de sangre del paciente respectivo, lo que sugiere una alta incidencia de infecciones endógenas. Reddy et al. informaron anteriormente sobre un programa de control de infecciones que abordaba Enterobacteriales productores de ESBL: encontraron que de 413 pacientes colonizados, el 8,5% desarrolló una infección del torrente sanguíneo posterior, lo que representa el 34,3% de todas las infecciones del torrente sanguíneo por Enterobacteriales productores de ESBL16. Nuestros datos enfatizan una vez más el valor de la detección adaptada al riesgo y, en caso de infección, la necesidad de seleccionar una terapia empírica en consecuencia. Además, la epidemiología de los genes BLEE subyacentes debe examinarse periódicamente y analizarse junto con los datos de susceptibilidad respectivos.

Con este estudio se abordaron E. coli y tres genes, únicamente. Esta es una deficiencia obvia y no podemos descartar que otros genes ESBL también estuvieran presentes en nuestros aislados. Sin embargo, en 109 de los 117 aislamientos (93,1 %), se detectó al menos uno de los genes investigados y los resultados están en línea con la epidemiología reportada a nivel mundial.

La investigación molecular de E. coli productora de ESBL recolectada de hemocultivos de pacientes en el Hospital Universitario de Leipzig, Alemania, entre 2015 y 2018 mostró una distribución de genes de resistencia que estaba de acuerdo con estudios recientes en Alemania y en todo el mundo con CTX- Siendo M-15 el genotipo más prevalente en nuestro estudio.

Los resultados de nuestro estudio proporcionan posibles indicaciones de un foco de infección endógeno para una bacteriemia por E. coli y, por lo tanto, enfatizan la importancia de los programas de detección para pacientes de alto riesgo.

Los conjuntos de datos generados y/o analizados durante el estudio actual están disponibles del autor correspondiente a pedido razonable.

β-lactamasa de espectro extendido

Cepas de E. coli aisladas de hemocultivos

Cepas de E. coli recuperadas del análisis de muestras de heces

Concentración inhibitoria mínima

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Queremos agradecer a todo el personal del laboratorio que participó en este estudio.

Financiamiento de acceso abierto habilitado y organizado por Projekt DEAL.

Estos autores contribuyeron por igual: Nina Doerr y Nadine Dietze.

Instituto de Microbiología Médica y Virología, Departamento de Microbiología, Universidad de Leipzig, Johannisallee 30, 04103, Leipzig, Alemania

Nina Doerr, Nadine Dietze, Norman Lippmann y Arne C. Rodloff

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AR, NDI y NL realizados para el diseño del estudio. AR y NDI supervisaron este estudio. NDI y NDO recopilaron los datos. NDO realizó las pruebas de laboratorio y el examen de moléculas de las cepas y fue uno de los principales contribuyentes en la redacción del manuscrito. NDI y NDO analizaron e interpretaron los resultados. Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final.

Correspondencia a Nina Doerr.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

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Acceso abierto Este artículo tiene una licencia internacional Creative Commons Attribution 4.0, que permite el uso, el intercambio, la adaptación, la distribución y la reproducción en cualquier medio o formato, siempre que se otorgue el crédito correspondiente al autor o autores originales y a la fuente. proporcionar un enlace a la licencia Creative Commons e indicar si se realizaron cambios. Las imágenes u otro material de terceros en este artículo están incluidos en la licencia Creative Commons del artículo, a menos que se indique lo contrario en una línea de crédito al material. Si el material no está incluido en la licencia Creative Commons del artículo y su uso previsto no está permitido por la regulación legal o excede el uso permitido, deberá obtener el permiso directamente del titular de los derechos de autor. Para ver una copia de esta licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

Reimpresiones y permisos

Doerr, N., Dietze, N., Lippmann, N. et al. Betalactamasas de espectro extendido encontradas en aislamientos de Escherichia coli obtenidos de hemocultivos y muestras de heces correspondientes. Informe científico 13, 8940 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-36240-y

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Recibido: 27 mayo 2022

Aceptado: 31 de mayo de 2023

Publicado: 02 junio 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-36240-y

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